spandoek

Introductie van nucleïnezuurextractietechnologie

Nucleïnezuuriinleiding

Nucleïnezuur is onderverdeeld in deoxyribonucleïnezuur (DNA) en ribonucleïnezuur (RNA), waaronder RNA is onderverdeeld in ribosomaal RNA (rRNA), messenger-RNA (mRNA) en transfer-RNA (tRNA) volgens zijn verschillende functies.DNA is voornamelijk geconcentreerd in de kern, mitochondriën en chloroform, terwijl RNA voornamelijk in het cytoplasma wordt gedistribueerd.Als de materiële basis van genexpressie speelt nucleïnezuurextractie een uiterst belangrijke rol in moleculair biologisch onderzoek en klinische moleculaire diagnose.De concentratie en zuiverheid van de nucleïnezuurextractie zullen rechtstreeks van invloed zijn op de daaropvolgende PCR, sequencing, vectorconstructie, enzymdigestie en andere experimenten.

 Nucleïnezuurextractie- en zuiveringsmethode 

① Fenol/chloroform-extractiemethode

Fenol/chloroformextractie is een klassieke methode voor DNA-extractie, waarbij hoofdzakelijk twee verschillende organische oplosmiddelen worden gebruikt om de monsters te behandelen, waarbij op DNA gebaseerd nucleïnezuur in de waterfase, lipiden in de organische fase en eiwitten tussen de twee fasen worden opgelost.Deze methode heeft de voordelen van lage kosten, hoge zuiverheid en goed effect.De nadelen zijn ingewikkelde bediening en lange tijd.

② Trizol-methode

Trizol-methode is een klassieke methode voor RNA-extractie.De Trizol-methode wordt na centrifugatie met chloroform verdeeld in een waterfase en een organische fase, waarbij het RNA wordt opgelost in de waterfase, de waterfase wordt overgebracht naar een nieuwe EP-buis, precipitatie wordt verkregen na toevoeging van isopropanol en vervolgens ethanolzuivering.Deze methode is geschikt voor RNA-extractie uit dierlijke weefsels, cellen en bacteriën.

③ Centrifugaalkolomzuiveringsmethode

Centrifugekolomzuiveringsmethode kan DNA specifiek adsorberen door speciale siliciummatrix-adsorptiematerialen, terwijl RNA en eiwit soepel kunnen passeren, en vervolgens een hoge zout-lage PH gebruiken om nucleïnezuur te combineren, laag-zout hoge PH-waarde-elutie om nucleïnezuur te scheiden en te zuiveren.De voordelen zijn een hoge zuiveringsconcentratie, hoge stabiliteit, geen noodzaak voor organisch oplosmiddel en lage kosten.Het nadeel is dat het stap voor stap moet worden gecentrifugeerd, meer bedieningsstappen.

fiytjt (1)

④ Magnetische kralenmethode

De magnetische kralenmethode is om het celweefselmonster door het lysaat te splitsen, het nucleïnezuur in het monster vrij te geven en vervolgens worden de nucleïnezuurmoleculen specifiek geadsorbeerd op het oppervlak van de magnetische kraal, terwijl onzuiverheden zoals eiwitten en suikers achterblijven. de vloeistof.Via de stappen van het splitsen van celweefsel, het binden van magnetische kralen aan nucleïnezuur, het wassen van nucleïnezuren, het elueren van nucleïnezuren, enz. wordt uiteindelijk zuiver nucleïnezuur verkregen.De voordelen zijn eenvoudige bediening en kortstondig gebruik, zonder de noodzaak van stapsgewijs centrifugeren.Het heeft lage technische vereisten en kan automatische en massale werking realiseren.De specifieke combinatie van magnetische parel en nucleïnezuur zorgt ervoor dat het geëxtraheerde nucleïnezuur een hoge concentratie en zuiverheid heeft.Het nadeel is dat de huidige marktprijs relatief duur is.

fiytjt (2)

⑤ Andere methoden

Naast de bovenstaande vier methoden zijn er kokende kraken, geconcentreerde zoutmethode, anionische wasmiddelmethode, ultrasone methode en enzymatische methode, enz.

 Type nucleïnezuurextractie

Foregene beschikt over het toonaangevende Direct PCR-platform ter wereld, een dubbelkoloms RNA-isolatieplatform (alleen DNA + alleen RNA).De belangrijkste producten zijn onder meer DNA/RNA-isolatiekits, PCR en Direct PCR-reagentia, moleculaire laboratoriumreagentia-series.

① Totale RNA-extractie

Totale RNA-extractiemonsters omvatten bloed, cellen, dierlijke weefsels, planten, virussen, enz. Hoge zuiverheid en hoge concentratie totaal RNA kunnen worden verkregen door totale RNA-extractie, die kan worden gebruikt bij RT-PCR, chipanalyse, in vitro vertaling, moleculair klonen, Dot Blot en andere experimenten.

Foregene-gerelateerdRNA-isolatiekits

fiytjt (3)

Dierlijke totaal RNA-isolatiekit--Extraheer snel en efficiënt totaal RNA van hoge zuiverheid en kwaliteit uit verschillende dierlijke weefsels.

fiytjt (4)

Celtotaal RNA-isolatiekit--Uit verschillende gekweekte cellen kan in 11 minuten zeer gezuiverd totaal-RNA van hoge kwaliteit worden verkregen.

fiytjt (5)

Plantentotaal RNA-isolatiekit--Extraheer snel totaal RNA van hoge kwaliteit uit plantenmonsters met een laag polysacharide- en polyfenolgehalte.

fiytjt (6)

Virale RNA-isolatiekit--Isoleer en zuiver snel viraal RNA uit monsters zoals plasma, serum, celvrije lichaamsvloeistoffen en supernatanten van celculturen.

② Genomische DNA-extractie

Genomische DNA-extractiemonsters omvatten grond, uitwerpselen, bloed, cellen, dierlijke weefsels, planten, virussen, enz. Genomische DNA-extractie kan worden gebruikt bij de vertering van enzymen, de constructie van DNA-bibliotheken, PCR, antilichaambereiding, Western blot-hybridisatieanalyse, genchip, hoge -doorvoersequencing en andere experimenten.

Foregene-gerelateerdDNA-isolatiekits

fiytjt (7)

DNA-isolatiekit voor dierlijk weefsel--Snelle extractie en zuivering van genomisch DNA uit meerdere bronnen, zoals dierlijke weefsels, cellen, enz.

fiytjt (8)

Bloed-DNA Midi-kit (1-5 ml)--Zuiver snel genomisch DNA van hoge kwaliteit uit antistollingsbloed (1-5 ml).

fiytjt (9)

Buccale uitstrijkje/FTA-kaart DNA-isolatiekit--Zuiver snel genomisch DNA van hoge kwaliteit uit monsters van het monduitstrijkje/FTA-kaart.

fiytjt (10)

DNA-isolatiekit voor planten--Zuiver en verkrijg snel genomisch DNA van hoge kwaliteit uit plantenmonsters (inclusief polysachariden en polyfenol plantenmonsters)

③ Plasmide-extractie

Plasmide is een soort cirkelvormig klein molecuul-DNA in cellen, dat een veel voorkomende drager is voor DNA-recombinatie.De methode voor plasmide-extractie is het verwijderen van RNA, het scheiden van plasmide van bacterieel genomisch DNA en het verwijderen van eiwitten en andere onzuiverheden om relatief zuiver plasmide te verkrijgen.

fiytjt (11)

Algemene plasmide minikit--Zuiver snel plasmide-DNA van hoge kwaliteit uit getransformeerde bacteriën voor routinematige moleculaire biologie-experimenten zoals transformatie en enzymvertering

④ Andere extractietypes, miRNA-extractie, enz.

fiytjt (12)

Dierlijke miRNA-isolatiekit--Extraheer snel en efficiënt kleine RNA-fragmenten van 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA uit verschillende dierlijke weefsels en cellen

 Vereisten voor nucleïnezuurextractie en zuivering zijn het resultaats

① Om de integriteit van de primaire structuur van nucleïnezuur te garanderen.

② Verminder de interferentie van eiwitten, suikers, lipiden en andere macromoleculen

③ Er mag geen organisch oplosmiddel of een hoge concentratie metaalionen aanwezig zijn die het enzym in nucleïnezuurmonsters kunnen remmen.

④ RNA- en andere nucleïnezuurcontaminatie moet worden geëlimineerd bij het extraheren van DNA, en omgekeerd.

 


Posttijd: 24 november 2022
nav_icon